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    ELISA試劑盒優化加樣需要注意那些地方?

    發布時間: 2020-06-16  點擊次數: 103次
       ELISA試劑盒在國內有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA 、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。

    ELISA試劑盒

      ELISA試劑盒加樣的優化:在這一進程中,一般情況下有三次加樣,它們分別是加標本,加酶物,加底物。凍住血清融解後,蛋白質部分濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上劇烈振動。製備血漿標本需借助於抗凝劑,而血清標本隻需待血清天然凝集、縮短後即可獲得。也可在板孔中參與稀釋液,再在其參與血清標本,然後在微型顫動器上顫動1分鍾以確保混和。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置於4℃,跨過一星期測定的需低溫冰存。
      1、血清:用無菌管搜集,室溫血液自然凝固10-20分鍾,2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如出現堆積,應再次離心。
      2、尿液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存過程中如有堆積構成,應再次離心。
      3、血漿:應根據標本的要求挑選EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鍾後,2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構成,應該再次離心。
      4、胸腹水:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構成,應再次離心。
      5、腦脊液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構成,應再次離心。
      6、唾液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構成,應再次離心。
      7、細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管搜集。2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構成,應再次離心。
      8、牛奶:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鍾左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構成,應再次離心。
      ELISA試劑盒檢測過程中的注意事項:
      1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但zui好有專業人員進行矯正。
      2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體後,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
      3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢複到室溫,以使結果更穩定。
      4、實驗時,要使底物避光保存。
      5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
      6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
      7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
      8、液體全部加完後,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
      9、溫浴時,要用不幹膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。
      10、洗板時,每次洗液加入後,應靜置1分鍾,使清洗更加徹底。沒有洗板機時,倒去液體後,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍幹。
      11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配製PH7.4,0.02M的磷酸緩衝液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉後可長期保存。
      12、底物是光敏感的,要在臨用前現配。
      13、檢測前,要打開酶標儀,使之穩定10分鍾以上。
      14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。
      15、待檢樣品要澄清,否則會影響結果。
      16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。
      17、應盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數據的準確性。
      18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
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