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    ELISA試劑盒如何鑒定抗體

    發布時間: 2020-04-13  點擊次數: 132次
       無論做什麽都是熟能生巧,ELISA實驗自然也是如此,其中的操作技術是需要充分的文字了解與反複實踐的試劑,良好狀態的儀器,排除各種影響因素的幹擾和正確操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。本文講一講ELISA試劑盒如何鑒定抗體。
      1、抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力。抗體的特異性高,它的識別能力就強。
      衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑製試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑製曲線,計算各自的結合率,求出各自在IC50時的濃度,並按下列公式計算交叉反應率。交叉反應率=IC50時抗原濃度(Y)/IC50近似抗原物質的濃度(Z)X100%。如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質的交叉反應率近似為0,即該血清的特異性較好。
      2、抗體的效價鑒定:不管是用於診斷還是用於治療,製備抗體的目的都是要求較價。不同的抗原製備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應、瓊脂擴散試驗、酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所製備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如製備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
      3、抗體的親和力鑒定:抗體的親和力是指抗體和抗原結合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結合位點與抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。有助於維持抗原抗體複合物穩定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側鏈相反電荷基因的庫侖力、範德華力和空間斥力。親和力常以親和常數K表示,K的單位是L/mol,通常K的範圍在108~1010/mol,也有多達1014/mol。抗體親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
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