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    Elisa試劑盒的三種常見檢測辦法

    發布時間: 2020-07-13  點擊次數: 82次
       ELISA測定形式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競賽抑製法,其間競賽抑製法(HBeAb,HBcAb等選用)因受操作時差所引起的不公平競賽等因素的影響,成果重複性較差,質量較難操控。不同批次的ELISA試劑在製作過程中很難確保質量完全一致,即使是通過批批檢的項目其檢測成果也存在差異,因此有必要挑選和訂購長批號的試劑,並確保保存條件。
      嚴格執行這一規範能夠防止因試劑批號改變而從頭樹立質控體係及從頭評估試劑的複雜過程,而且能夠確保成果的穩定性;對於效期短、使用率低的試劑,應當小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,防止重複凍融形成試劑的失效。下麵就依據Elisa試劑盒的三種常見檢測辦法剖析?下具體原理。歡迎參閱學習。
      問:什麽是競賽性ELISA?
      答:競賽ELISA基於競賽結合技能,即樣本中的待測分子與固定量的符號的相同分子(名优馆ioses安装一般用堿性磷酸酶作為符號)同時與固定在孔板上的抗體的同一結合位點進行競賽,參照規範曲線,實驗數據值是定量的。
      問:什麽是夾心ELISA?
      答:夾層ELISA選用對樣本中剖析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體,然後用第二個帶符號的抗體作檢測,檢測抗體對剖析物也是專注的。當參照規範曲線時,實驗數據值是定量的。
      問:什麽是直接ELISA?
      答:直接ELISA是將被測的剖析物直接包膜在微孔板外表,然後用測驗抗體來證明被測剖析物的存在。當與重組蛋白(規範曲線)進行參照時,實驗數據值是半定量的。
      Elisa試劑盒的注意事項:
      正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控製試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
      實驗條件的選擇
      在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
      (1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
      (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表麵時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被後,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對於多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
      (3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然後再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度。
      (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間後,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鍾為宜。底物使用液必須新鮮配製,尤其是H2O2在臨用前加入。
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